产品货号：
JN3231
中文名称：
Illumina测序文库制备试剂盒
英文名称：
BalbNGS DNA Library FlashPrep Kit for Illumina
产品规格：
24T|96T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒是针对Illumina高通量测序平台开发的专用试剂盒，可将DNA制备成Illumina高通量测序平台专用的测序文库。该试剂盒采用新型的体外转座技术，只需5分钟即可一步实现DNA的片段化与接头连接，实验操作快速简单，无需经过传统文库制备时的片段化、末端修复、接头连接等繁琐步骤。使用本试剂盒建库时，起始DNA量更灵活，有50ng、20ng、5ng、1ng四种规格可选（目录号分别为：JN3231，JN3232，JN3233，JN3234）。
试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证文库质量的稳定性和重复性。
保存：-20℃，有效期一年。
转座复合体在55℃条件下孵育5min便能一步实现基因组DNA的片段化与加接头两个过程。片段化产物经N5/N7引物（BalbNGS Index Kit for Illumina，提供8种N5引物及12种N7引物的选择，目录号：JN3239）扩增后，再经过磁珠分选，便可得到测序文库。
建库原理及流程示意图如下：
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-Index2(i5)-TCGTCGGCAGCGTCAGAT
GTGTATAAGAGACAG-xxxxxxxxx-CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGACIndex1(i7)-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3'
Adapter：转座复合物中包被的接头，共两种，分别带有N5/N7引物识别序列及转座酶识别序列，文库打断的同时会添加到DNA片段两端
i5和i7：分别代表Index2(i5)和Index1(i7)，均为8bp；其中Index2(i5)有8种，Index1(i7)有12种
N5和N7：分别携带Index2(i5)和Index1(i7)的引物
-xxxxxxxxx-:插入序列
流程简示：
附表一
文库长短分布检测及长度分选效果：
Agilent 2100 Bioanalyzer文库质量分析
相关搜索：Illumina测序文库制备试剂盒，Illumina测序文库构建试剂盒，Illumina DNA测序建库试剂盒，BalbNGS DNA Library FlashPrep Kit for Illumina
- 快速简单，流畅高效，90分钟完成文库制备；
- DNA起始量1ng起，可用于微量样本测序，包含四种起始规格，有效避免DNA起始量不足的情况。
试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证文库质量的稳定性和重复性。
| 组分 | 24T | 96T |
| Transposon Mix | 48μL | 192μL |
| 5×Reaction Buffer | 120μL | 480μL |
| 5×Stop Buffer | 135μL | 540μL |
| AmpliMix | 600μL | 2.4mL |
保存：-20℃，有效期一年。
转座复合体在55℃条件下孵育5min便能一步实现基因组DNA的片段化与加接头两个过程。片段化产物经N5/N7引物（BalbNGS Index Kit for Illumina，提供8种N5引物及12种N7引物的选择，目录号：JN3239）扩增后，再经过磁珠分选，便可得到测序文库。
建库原理及流程示意图如下：
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-Index2(i5)-TCGTCGGCAGCGTCAGAT
GTGTATAAGAGACAG-xxxxxxxxx-CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGACIndex1(i7)-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3'
Adapter：转座复合物中包被的接头，共两种，分别带有N5/N7引物识别序列及转座酶识别序列，文库打断的同时会添加到DNA片段两端
i5和i7：分别代表Index2(i5)和Index1(i7)，均为8bp；其中Index2(i5)有8种，Index1(i7)有12种
N5和N7：分别携带Index2(i5)和Index1(i7)的引物
-xxxxxxxxx-:插入序列
流程简示：
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- 实验耗材准备
新鲜配制的80%乙醇、灭菌超纯水、低吸附EP管和PCR管、磁力架、PCR仪、磁珠。 - 起始DNA的准备与要求
纯化过的DNA溶于灭菌纯水或10mM Tris-HCl(pH8.0)，吸光度260/280在1.8～2.0之间。因为转座体用量与DNA起始量密切相关，所以准确测定DNA浓度是实验成功的关键。推荐使用Qubit或荧光染料PicoGreen进行浓度测定，请勿使用以吸光度为基础的任何测定方法。
- DNA片段化
- 于室温融解5×Reaction buffer、5×Stop buffer，轻柔混匀后备用；从4℃取出磁珠，室温静置30min备用。
- 在灭菌PCR管中依次添加各反应组分：
成分 用量 5×Reaction buffer 4μL DNA 50ng(或20ng、5ng、1ng) Transposon Mix 2μL ddH2O 至20μL
使用移液器轻轻吹打20次，充分混匀。十分重要！ - 将样品置于PCR仪中，反应程序设置如下：
温度 时间 105℃ 热盖 55℃ 5min 10℃ 10min - 从PCR仪中取出样品，加入5μL Stop Buffer，移液器轻柔吹打混匀后再次放回PCR仪，55℃孵育5min后取出。
- 于室温融解5×Reaction buffer、5×Stop buffer，轻柔混匀后备用；从4℃取出磁珠，室温静置30min备用。
- PCR扩增
- 将灭菌PCR管置于冰浴中配制55μL反应体系，依次添加各反应组分：
成分 用量 步骤1产物 25μL N5引物（8选1） 2.5μL N7引物（12选1） 2.5μL AmpliMix 25μL - 移液器轻轻吹打，充分混匀。
- PCR扩增程序如下：
温度 时间 循环数 72℃* 3min 1 98℃ 30sec 1 98℃ 30sec 4～13 60℃ 30sec 72℃ 120sec 72℃ 2min 1 10℃ Hold -
注*：72℃孵育3min为链置换反应，此步骤不可省略。
PCR循环数多则文库产量高，但对应Duplication会增多，请根据测序需要进行选择。每种试剂盒，不同循环数对应的文库产出请参照附表一。
- 将灭菌PCR管置于冰浴中配制55μL反应体系，依次添加各反应组分：
- 扩增产物长度分选
如对文库长度分布无特殊要求，可直接使用1.0×磁珠纯化文库扩增产物，不需进行片段分选。
以下为采用磁珠两步分选法对扩增产物进行长度分选的步骤，请优选BalbNGS DNA Screen Beads(货号：JN3240)，如使用其他品牌磁珠，使用方法请以该品牌说明书推荐的体系为准。文库平均总长度 ~350bp ~450bp ~550bp ~680bp 文库平均插入长度 ~220bp ~320bp ~420bp ~550bp 第一轮磁珠用量V1 0.7× 0.6× 0.55× 0.45× 第二轮磁珠用量V2 0.2× 0.15× 0.15× 0.15×
举例：“0.7×”代表磁珠与PCR产物的体积比，若PCR产物体积为50μL，则第一轮磁珠用量0.7×50μL =35μL，第二轮磁珠用量为：0.2×50μL=10μL。
注意：由于PCR过程中水分蒸发导致PCR产物体积小于50μL，请务必用ddH2O补齐至50μL，否则会导致分选长度和预期不一致。
- 涡旋振荡混匀磁珠后，吸取V1体积磁珠加入50μL PCR产物中，使用移液枪轻轻吹打充分混匀，室温孵育5min；
- 将反应管短暂离心后置于磁力架，使磁珠与液体分离（约5min，溶液澄清后），小心转移上清至干净的EP管中，丢弃磁珠；
- 涡旋振荡混匀磁珠后，吸取V2体积磁珠至上清中，使用移液枪轻轻吹打充分混匀，室温孵育5min；
- 将反应管短暂离心后置于磁力架，使磁珠与液体分离（约5min，溶液澄清后），小心移除上清；
- 加入200μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30sec后，小心移除上清，此过程仍保持反应管置于磁力架中；
- 重复步骤（5）一次；
- 保持反应管置于磁力架中，打开管盖，室温晾干约7min，使乙醇充分挥发，切记磁珠不要干燥过度；
- 将反应管从磁力架上取下，加入22μL无菌超纯水洗脱，吹打混匀或涡旋混匀后室温孵育3min；
- 将反应管短暂离心后置于磁力架，使磁珠与液体完全分离（约2min，溶液澄清后），小心吸取20μL上清至新的无菌PCR管内中，-20℃保存。
附表一
| JN3231(50ng DNA起始)扩增循环数： | 4 | 5 | 6 | 7 |
| JN3232(20ng DNA起始)扩增循环数： | 6 | 7 | 8 | 9 |
| JN3233(5ng DNA起始)扩增循环数： | 8 | 9 | 10 | 11 |
| JN3234(1ng DNA起始)扩增循环数： | 11 | 12 | 13 | 14 |
| 文库产出（不进行片段分选，ng）： | 400 | 600 | 1000 | 1500 |
文库长短分布检测及长度分选效果：
Agilent 2100 Bioanalyzer文库质量分析
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